高效液相色譜柱由柱管、壓帽、卡套(密封環)、篩板(濾片)、接頭、螺絲等組成。柱管多用不鏽鋼製成,壓力不高於70Kg/cm2時,也可采用厚壁玻璃或石英管,管內壁要求有很高的光潔度。為提高柱效,減小管壁效應,不鏽鋼柱內壁多經過拋光。也有人在不鏽鋼柱內壁塗敷氟塑料以提高內壁的光潔度,其效果與拋光相同還有使用熔融矽或玻璃襯裏的,用於細管柱。色譜柱兩端的柱接頭內裝有篩板,是燒結不鏽鋼或鈦合金。取決於填料粒度,目的是防止填料漏出,柱內徑一般是根據柱長、填料粒徑和折合流速來確定,目的是為了避免管壁效應。
高效液相色譜柱要如何反衝:
液相色譜柱反衝時遵循的原則是用比流動相洗脫能力更強的溶劑衝洗。
反相色譜柱可以選擇極性較小的溶劑反向衝洗,推薦如下衝洗方法:
水→甲醇→乙腈→異丙醇→二氯甲烷→異丙醇→乙腈
正相色譜柱可以選擇極性較大的溶劑反向衝洗,衝洗方法如下:
正己烷→二氯甲烷→乙酸乙酯→異丙醇→乙腈→甲醇
如果流動相中含有緩衝鹽,在運行序列過程中出現柱壓異常升高的現象,則發生了緩衝鹽在色譜柱柱床上析出,推薦采用如下維護方法:
1、用甲醇/水反向衝洗色譜柱60個柱體積;
2、用甲醇/水反向衝洗色譜柱過夜。